流式細胞分選儀是一種精密儀器,主要用于對懸浮在液體中的細胞或其他微小顆粒進行快速、高精度的分析和分選。它基于流式細胞術(shù)原理,通過激光照射單個細胞,同時檢測細胞的物理、生化或分子特性,并根據(jù)預(yù)設(shè)參數(shù)自動分選出特定的細胞亞群。
流式細胞分選儀是一種基于流式細胞術(shù)原理的精密儀器,能夠?qū)腋≡谝后w中的細胞進行多參數(shù)快速分析和分選。其工作原理涉及流體動力學(xué)、光學(xué)檢測和電學(xué)分選等多個系統(tǒng)協(xié)同作用。
樣品制備與流體聚焦: 樣本細胞需制備成單細胞懸液,并通過壓力注入儀器的流動室;鞘液在高壓下從鞘液管噴出,包裹細胞形成鞘流,使細胞排成單列依次通過測量區(qū)(激光與液流垂直相交點),這一過程稱為流體動力學(xué)聚焦,確保細胞逐一通過激光束。
光學(xué)檢測與信號生成: 激光束(常用488nm波長)垂直照射細胞,細胞產(chǎn)生散射光和熒光信號:前向角散射(FSC)反映細胞大小,側(cè)向角散射表征細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜度;熒光信號則通過多色熒光標記檢測,不同熒光染料發(fā)射的光被濾光片(如帶通、長通或短通濾光片)分離后,由光電檢測器轉(zhuǎn)換為電信號。
分選機制與電荷偏轉(zhuǎn): 在分選模式下,流動室噴口處的壓電晶體高頻振動使液流斷裂為均勻液滴,每個液滴可能包含一個細胞;系統(tǒng)實時分析信號,對符合預(yù)設(shè)參數(shù)(如熒光強度)的細胞所在液滴施加正負電荷,未充電液滴落入廢液,帶電液滴在高壓靜電場中偏轉(zhuǎn)至指定收集器,從而實現(xiàn)高速分選。
系統(tǒng)集成與分選性能: 儀器由液流系統(tǒng)、激光光源、光學(xué)系統(tǒng)和分選系統(tǒng)集成,分選性能包括分選活性)、得率和純度,支持1-4路分選模式,適用于免疫學(xué)、細胞生物學(xué)等領(lǐng)域的細胞亞群分離。